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預制膠 電泳首選
  發表時間: 2018-05-21 07:05:49   瀏覽次數:

 WB 預制膠

WB 預制膠是一款高性能的小型聚丙烯酰胺凝膠,獨特的膠板設計可以提高條帶分辨率,改善樣品在上樣孔里的分布狀態,使得條帶更加均勻。預制膠不含有SDS,依賴于采用合適的電泳緩沖液和相應試劑,是SDS-PAGE和非變性凝膠電泳的理想材料


預制膠提供不同濃度的梯度膠和固定濃度膠。梯度濃度包括(4-20%, 4-12%8-16%) ,固定濃度膠包括(8%,10%12%) 點樣孔數分別為10孔,12孔和15孔。

主要特點:

上樣量大——最大上樣量可達 80 μl, 高于同類產品

簡單易用——特殊上樣口設計,普通 10 μl 吸頭上樣

高分辨率——蛋白條帶分離更為清晰和均一

保質期長——常溫使用,2-8℃可保存 12 個月

兼容性好——適合大多數小型電泳槽

重復性高——不同批次預制膠的一致性好

物美價廉——節約實驗成本

凝膠選擇指導一覽表:


 

操作使用

A、電泳緩沖液和電泳槽的準備

1、使用 WB 預制凝膠專用電泳緩沖液

2、將 WB 預制凝膠從包裝袋中取出,撕掉膠板底部的膠帶(如下圖)

 

 

 

 

3、平穩地將梳子從膠板中推出(見下圖)。 

 

4、將膠板放入凝膠電泳裝置中。

請參閱電泳裝置制造商的使用說明。

Bio-Rad Mini-PROTEAN? Tetra System 電泳槽的使用注意事項: 將電泳槽內框架的綠色硅橡膠密封條取出,然后將其平坦的一面朝外并重新插回內框架的凹槽中。

 

 

 

 

5、在電泳槽的內槽中倒入足夠的 1X 電泳緩沖液,使其覆蓋上樣孔 5-7mm,在外槽中加入相同的電泳緩沖液以確保適當的冷卻。為獲得最好的效果,外槽的緩沖液需要加到與內槽持平的位置或稍低,但不可漫過膠板。(注:Tri-Glycine 電泳緩沖液與 WB 預制凝膠不兼容,請不要使用。

 

6、使用注射器或其他工具吸取適量的 1X 的電泳緩沖液,將上樣孔輕輕沖洗干凈,去除氣泡和殘留的儲存緩沖液。

 

B、樣品的制備

1、SDS-PAGE 凝膠電泳

蛋白樣品

X ul

蛋白上樣緩沖液(5X)

2 ul

去離子水

加至 10ul

上樣前將樣品加熱至10010 分鐘

2、非變性 PAGE 凝膠電泳

 

WB 預制凝膠中不含有 SDS ,可用于非變性電泳。蛋白質樣品需使用非還原性和非變性的樣品緩沖液制備,以保持蛋白質的二級結構和原生電荷。蛋白質的遷移率取決于蛋白質的大小、空間結構以及它的凈電荷。WB 預制凝膠為 pH6.4,進行非變性電泳時需注意蛋白樣品的酸堿性,同時,非變性電泳時間同城比 SDS-PAGE 電泳時間長。

 

蛋白樣品

X ul

蛋白上樣緩沖液(5X)

2 ul

去離子水

加至 10ul

 不用加熱

C、電泳過程

1蛋白質樣品上樣操作

讓上樣槍頭的尖端垂直插入到上樣孔中能夠獲得最佳的上樣效果,槍頭不能戳破膠體,更不能使膠板變形導致樣品漏液

 

注意事項:最佳上樣量必須通過實驗來確定,樣品過量會導致條帶的拖尾和失真。加入過量的含自由狀態碳水化合物的蛋白,可能會導致條帶變形或者蛋白無法穿入膠中  

2.將電泳槽蓋子蓋好,并將電源線插頭插入電泳儀電泳插孔(顏色配對),在 140V 電壓下電泳 45-55 分鐘直溴酚藍條帶跑到凝膠底部。

                        WB預制凝膠電泳參數

電壓

開始電流

結束電流

電泳時間

140V

75-100mA

30-50mA

45-55 分鐘

凝膠電泳時間,取決于環境溫度,需要自行摸索。

注意事項:確保使用兼容的電泳槽,內外槽之間液體的泄露會導致低遷移率。電泳時間  可能會改變,取決于電源和凝膠濃度

3、從膠板中取出凝膠

用試劑盒自帶的撬具,在下圖紅色箭頭的三個位置上下撬動,直至膠板兩側被完全分開,小心取出凝膠進行后續實驗操作

 

廣州速聚生物科技有限公司

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